อธิบาย: ห้าขั้นตอนในการตรวจหา coronavirus (COVID-19)

กระบวนการนี้อธิบายให้ The Indian Express อธิบายโดย Dr V Ravi ศาสตราจารย์อาวุโสและหัวหน้าภาควิชาไวรัสวิทยา NIMHANS

พบเลือดปลอมในหลอดทดลองที่ติดฉลากว่า coronavirus (COVID-19) ในภาพประกอบนี้ซึ่งถ่ายเมื่อวันที่ 17 มีนาคม 2020 (Reuters)

ดร.วี ราวี ศาสตราจารย์อาวุโสและหัวหน้าภาควิชาไวรัสวิทยา NIMHANS อธิบายขั้นตอนการตรวจหาเชื้อ coronavirus เพื่อ เว็บไซต์นี้ . นี่คือห้าขั้นตอน:

การรวบรวมและการขนส่ง

ศูนย์ทดสอบใช้ไม้กวาดจากโพรงจมูกและหลังคอ (คอหอย) และวางตัวอย่างในสื่อสำหรับขนส่งไวรัส ซึ่งประกอบด้วยเกลือและอัลบูมินที่สมดุลเพื่อป้องกันไม่ให้ไวรัสสลายตัว จากนั้นจะขนส่งตัวอย่างในห้องเย็นไปยังห้องปฏิบัติการทดสอบ

การสกัดไวรัส RNA

Coronaviruses เช่น SARS-CoV (ซึ่งเกิดขึ้นในประเทศจีนในปี 2002-03), MERS-CoV (ซึ่งปรากฏในซาอุดิอาระเบียในปี 2012) หรือ SARS-CoV-2 ปัจจุบันซึ่งทำให้เกิดการระบาดของ COVID-19 มีขนาดใหญ่ , จีโนม RNA สายเดี่ยว ห้องปฏิบัติการทดสอบจะดึง RNA ออกจากตัวอย่าง โดยใช้ชุดเครื่องมือที่มีขายทั่วไป (เช่น ชุดที่ผลิตโดยบริษัทต่างๆ เช่น QIAGEN)

การใส่ THE RNA ลงใน THE PCR mix

RNA ที่สกัดแล้วจะถูกเติมลงในส่วนผสมของปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส (PCR) ซึ่งรวมถึง 'มาสเตอร์มิกซ์' ซึ่งมีเอ็นไซม์ 'reverse transcriptase' ที่แปลง RNA ให้เป็น DNA ส่วนผสมหลักประกอบด้วย Taq polymerase เอ็นไซม์ที่สร้างสำเนาของ DNA, นิวคลีโอไทด์ รวมถึงองค์ประกอบอื่นๆ เช่น แมกนีเซียม ซึ่งจำเป็นต้องมีไอออนเพื่อขยาย DNA

PCR ผสมยังประกอบด้วย 'รีเอเจนต์' เช่น 'ไพรเมอร์' และ 'โพรบ' ไพรเมอร์เป็นสาย DNA เฉพาะที่ออกแบบมาเพื่อจับกับ DNA ที่จะคัดลอก ใช้โพรบเพื่อตรวจหาลำดับเฉพาะในตัวอย่างดีเอ็นเอ WHO ได้แนะนำไพรเมอร์และโพรบเฉพาะสำหรับการทดสอบ COVID-19

สุดท้าย PCR ผสมประกอบด้วยยีนการดูแลทำความสะอาด - ยีนมนุษย์ปกติ (RNase P) ที่ใช้เพื่อให้แน่ใจว่าตัวอย่างถูกรวบรวมอย่างเหมาะสมและสกัด RNA

การขยาย DNA ของไวรัส

ตัวอย่างที่ผสม PCR จะถูกใส่ลงในหลอดหรือเพลต จากนั้นใส่ในเครื่องวงจรความร้อนที่ใช้ดำเนินการกระบวนการ PCR

ขั้นแรก RNA จะถูกแปลงเป็น DNA จากนั้นกระบวนการคัดลอกยีนก็เริ่มขึ้น ตัวหมุนเวียนความร้อนจะทำให้ส่วนผสมร้อนและทำให้เย็นลง โดยสลับไปมาระหว่างอุณหภูมิสามระดับ — สำหรับการละลาย DNA เพื่อแยกสองสายออก, สำหรับสีรองพื้นเพื่อจับกับ DNA และสำหรับการสังเคราะห์สายใหม่ — ทั้งหมดนี้ภายในวงจรเดียวที่คงอยู่นาน นาที. วงจรความร้อนทำงาน 30-40 รอบดังกล่าวเพื่อขยาย DNA เพื่อตรวจหาไวรัส

การทดสอบกับการควบคุม

แอมพลิฟายเออร์ดีเอ็นเอได้รับการทดสอบเทียบกับกลุ่มควบคุมเชิงบวก ซึ่งมักจะประกอบด้วยยีนของไวรัสที่โคลนนิ่งเป็นพลาสมิด และกลุ่มควบคุมเชิงลบ ซึ่งเป็นตัวอย่าง 'ที่ทราบ' ซึ่งได้ทำการทดสอบเชิงลบสำหรับไวรัสก่อนหน้านี้

RNase P ควรแสดงการขยายเสียง การควบคุมเชิงบวกควรเป็นบวก การควบคุมเชิงลบควรเป็นเชิงลบ และผลลัพธ์ใดก็ตามที่คุณได้รับจากตัวอย่าง ก็คือผลลัพธ์ที่ถูกต้อง นักประสาทวิทยา Dr V Ravi กล่าว เพื่อให้การทดสอบถูกต้องก่อนประกาศผล จะต้องเป็นไปตาม 'เกณฑ์ความถูกต้อง' บางประการ

อย่าพลาดจาก อธิบาย | การทดสอบ COVID-19 ทำงานอย่างไร

หากยีนการดูแลทำความสะอาด (RNase P) เป็นค่าบวก กลุ่มควบคุมเชิงบวกเป็นค่าบวก กลุ่มควบคุมเชิงลบเป็นค่าลบ และกลุ่มตัวอย่างไม่แสดงผลในเชิงบวกของ PCR ตัวอย่างจะถูกประกาศว่าเป็นค่าลบสำหรับ RNA ของไวรัส SARS-CoV-2 หากผล PCR เป็นบวก แสดงว่าผู้ป่วยติดเชื้อ COVID-19

แบ่งปันกับเพื่อนของคุณ: